Субстанция рекомбинантного а2-ИФН человека независимо от использованного штамма-продуцента Pseudomonas putida или Escherichia coli, является, как и большинство белков, довольно лабильным продуктом, как и природный ИФН. Потеря биологической активности препарата в процессе хранения необязательно обусловлена действием оставшихся после очистки примесей, например протеолитических ферментов среды культивирования. Нередко наблюдается обратная зависимость, когда с повышением очистки устойчивость белка падает.

С химической точки зрения ИФН представляет собой содержащую большое число активных групп макромолекулу, способную относительно легко вступать во взаимодействие с окружающей средой, например с кислородом воздуха, реагировать с различными компонентами раствора и т.п. Более того, отсутствие химических взаимодействий отнюдь не означает сохранения функциональной активности, так как иммунорегуляторные функции ИФН проявляются в первую очередь через его пространственную структурную организацию, т.е. вторичную и третичную структуры. Даже незначительные изменения в четвертичной структуре, в частности образование димеров, заметно меняют взаимодействие ИФН с организмом. Такой белок воспринимается уже как чужеродный, на него вырабатываются антитела, он становится мишенью для макрофагов, и соответственно лечебная эффективность оказывается заметно ниже.

Наконец, говоря о медицинской пригодности препаратов на основе субстанции ИФН, нельзя не учитывать, что белок, биологически активный в специфической пространственной конформации, именно и этой конформации и должен быть презентирован рецепторам клетки-мишени. Кроме тех отдельных случаев, когда мишень находится па поверхности тела, введение препарата должно быть преимущественно парентеральным, по крайней мере до тех пор, пока не будут найдены способы защиты белка до его всасывания в кровь слизистыми оболочками желудка, кишечника или иными клетками. Эти сведения и аналогия с лейкоцитарным ИФН, уже применяемым в медицине, требовали разработки инъекционной формы а2-ИФН рекомбинантного человеческого.

Наиболее простым способом обеспечить стабильность пространственной и химической структуры белка после его выделения очевидно является понижение температуры. В самом деле, замораживание субстанции и ее хранение при температуре ниже -40°С долго не сопровождаются снижением активности белка. Однако данный способ неприемлем для практического здравоохранения и существенно сдерживал бы возможности использования лекарственного средства. Сохранить активность белковых структур и даже вирусов и бактерий при приготовлении вакцин можно путем лиофильного высушивания.

Хотя лиофилизация используется давно и достаточно широко, всеобъемлющей теории подбора режимов и защитных сред до сих пор не создано. Однако существуют определенные рецептуры сред, обычно включающие сахара, природные и синтетические полимеры, гидролизаты и др. При отработке технологии высушивания субстанции рекомбинантного ИФН наиболее подробно исследовали те, которые использовались при приготовлении сухих инактивированных вакцин. Очевидно, что такая добавка, с одной стороны, уже признана безопасной для применения в инъекционном препарате, а с другой — показала эффективность в стабилизации конформации белка.

В процессе экспериментальных исследований лиофильных форм рекомбинантного ИФН для инъекций наиболее перспективной стабилизирующей добавкой был признан сывороточный альбумин человека. Действительно, этот белок является гомологичным для человеческого организма и обеспечивает хорошее сохранение активности ИФН. Так, в процессе замораживания/высушивания абсолютная биологическая активность а2-ИФН снижается не более чем в 3 раза. Наконец, что особенно важно в аспекте практического применения, активность препарата не снижается при его хранении в течение 2 лет в стандартном бытовом холодильнике. Суспензия ИФН с сывороточным альбумином человека в выбранных концентрациях удовлетворительно фильтруется на мембранных фильтрах с минимальным диаметром пор, что позволяет получать стерильный препарат без термообработки.

Перечисленные выше подходы и экспериментальные результаты позволили создать технологию, наработать и предложить для клинических исследований опытные серии сухого препарата рекомбинантного а -ИФН человека лиофилизированного в ампулах для инъекций, обеспечивающего после регидратации активность 1 млн ME в ампуле.

Однако по причинам, более подробно раскрытым ниже, особый интерес для лечения многих заболеваний имеют препараты с активностью 3 и 5 млн ME в ампуле. Пропорциональное увеличение количества вещества в ампуле не является очевидным решением уже только потому, что условия замораживания и дегидратация оказываются существенно иными и могут повлиять на стабильность белка как при приготовлении, так и при последующем хранении. С целью избежать этих и других нежелательных явлений изменили ряд технических особенностей лиофилизации. Используемая в настоящее время технология приготовления ИФН для инъекций с содержанием 3 и 5 млн ME в ампуле не увеличивает инактивацию на стадии приготовления и, как и для препарата 1 млн ME в ампуле, обеспечивает 100% сохранение специфической активности в течение 2 лет.