Now Reading
Состояние Т-системы иммунитета
0

Состояние Т-системы иммунитета

by admin29.01.2015

Реакция спонтанного розеткообразования характеризует одну из важнейших функций Т-лимфоцитов — их способность к адгезии, первому этапу, с которого начинается взаимодействие клетки с антигеном, а также к кооперации клеток в иммунном ответе.

Методика исследования. Необходимые материалы: гепарин, изотонический раствор натрия хлорида, среда 199, 3% раствор желатина, 25% раствор глютарового альдегида, взвесь эритроцитов барана, центрифужные пробирки, термостат, центрифуга.

К 1,9 мл изотонического раствора натрия хлорида добавляют 0,1 мл гепарина. В пробирку с кровью добавляют 3% раствор желатина из расчета 1 : 3, перемешивают и ставят пробирку в термостат на 35 мин, затем надосадочную жидкость отсасывают в центрифужную пробирку и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. Надосадок отсасывают, а к осадку добавляют 4-5 капель дистиллированной воды для гемолиза эритроцитов. Смесь отсасывают пипеткой и добавляют к ней избыток среды 199. Затем центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин. Отмывание клеток проводят трижды. Взвесь должна содержать около 2 х 106 клеток в 1 мл.

Приготовление взвеси эритроцитов барана: 0,15 мл эритроцитов барана разводят в 10 мл среды или изотонического раствора натрия хлорида. К 0,1 мл взвеси лимфоцитов добавляют 0,1 мл взвеси эритроцитов барана. Смесь оставляют в термостате при 37° С на 5 мин. Затем взвесь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин и ставят в холодильник на 1 ч. К осадку добавляют 2 капли глютарового альдегида для фиксации образовавшихся розеток, аккуратно перемешивают и оставляют на 20 мин при комнатной температуре. К взвеси добавляют избыток дистиллированной воды и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. Из осадка готовят мазки, фиксируют их метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому- Гимзе в течение 20 мин. Под микроскопом с иммерсией считают количество розеток.

Реакция бластной трансформации лимфоцитов в присутствии неспецифического митогена ФГА выявляет еще одно важнейшее свойство лимфоцитов — их способность отвечать трансформацией в активные лимфоциты.

Методика исследования. Необходимые материалы: среда 199, 10% раствор желатина, гепарин, ФГА, стерильные пробирки и флаконы, термостат, центрифуга, микроскоп.

Кровь берут в стерильную пробирку со средой 199. Среду готовят следующим образом: смесь 10 мл среды 199 с 0,1 мл гепарина разливают в пробирки по 1 мл. К смеси добавляют 10% раствор желатина из расчета 1 : 10 и ставят в термостат на 40 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в пробирку с небольшим количеством эритроцитов, добавляют к ней 3% раствор уксусной кислоты и подсчитывают число клеток в камере Горяева. Оптимальным для реакции является 2 млн клеток в 1 мл. Если число клеток окажется больше, то взвесь разводят до необходимой концентрации средой Игла; если число клеток меньше, то ее центрифугируют и осадок ресуспендируют в соответствующем количестве среды. Затем в суспензию добавляют антибиотики, разведенные средой Игла. Исходный раствор должен содержать по 100 000 ЕД пенициллина и стрептомицина.

Ваша эмоция
Нравится
0%
Интересно
0%
Не понятно
0%
Я в шоке!
0%
Злость
0%
Плачу
0%

Leave a Response

9 − семь =