Фагоцитарная активность нейтрофилов. Важнейшей характеристикой функции гранулоцитов является оценка их фагоцитарной активности. Ее снижение может быть результатом как недостаточности опсонирующих факторов сыворотки, так и дефектов самих клеток. Для определения фагоцитарной активности используют стандартные штаммы непатогенных микроорганизмов.

Методика определения фагоцитарной активности нейтрофилов. Необходимые материалы и реактивы: микропипетки или пипетки для взятия крови на СОЭ; пробирки — стеклянные или из пластика; предметные стекла; микроскоп с иммерсией; термостат; свежеприготовленный раствор 5% цитрата натрия; живая суточная культура микроорганизмов, например стафилококк — штамм 209; оптический стандарт мутности с образцами в 5, 10 и 20 ед., соответствующими 0,5-, 1- и 2-миллиардной взвеси микроорганизмов.

В пробирку, содержащую 0,1 мл 5% раствора цитрата натрия, вливают 0,2 мл капиллярной крови и добавляют 0,1 мл 2-миллиардной взвеси микроорганизмов. Инкубируют 30 мин при 37° С. Из взвеси клеток и микроорганизмов делают мазки, оставшуюся взвесь продолжают инкубировать еще в течение 1 ч и снова делают мазки. Мазки фиксируют смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому- Гимзе.

Под микроскопом просматривают 100 нейтрофилов, определяют количество поглощенных микробов.

Оценка фагоцитоза in vitro производится в соответствии с фазами реакции: через 30 мин и 2 ч. Поглотительная способность клеток оценивается по двум показателям: процент фагоцитоза, количество фагоцитов на 100 нейтрофилов через 30 мин и 2 ч инкубации, ФИ — среднее число микробов на 1 фагоцит через 30 мин и 2 ч инкубации. О последней фазе фагоцитоза — переваривании — судят по коэффициентам процента фагоцитоза и ФИ. Фагоцитоз считается завершенным при коэффициентах менее 1.

Тест с нитротетразолиевым синим используется для выявления так называемых активированных гранулоцитов и моноцитов. В основе активации фагоцитов лежит резкое усиление окислительных реакций. К числу индикаторов этого явления относится реакция с нитротетразолиевым синим: поглощенный из раствора, он под влиянием окислительных процессов в клетке превращается в нерастворимый формазан. Последний определяется в клетке в виде темно-синих гранул.

Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток в крови больного, например под влиянием инфекции. Результаты стимулированного теста дают представление о способности исследуемых нейтрофилов к активации in vitro. Этот тест следует проводить при сниженном числе спонтанных НСТ-положительных клеток у больных с бактериальной инфекцией, чтобы выявить наличие или отсутствие дефекта окислительного метаболизма.

Методика исследования. Необходимые реактивы и материалы: КН2РО4, Na2HPC>4, глюкоза, NaCl, нитротетразолиевый синий, гепарин, метиловый спирт, 1% водный раствор метиленового зеленого, микропипетки, предметные стекла, микроскоп с иммерсией.

А. 1% 15 М фосфатного буфера с pH 7,2 с добавлением 0,2% раствора глюкозы и 0,6% раствора натрия хлорида.

Б. 0,1% нитротетразолиевый синий в изотоническом растворе натрия хлорида. Для получения красителя необходимы длительное перемешивание и подогревание в горячей воде.

Растворы А и Б фильтруют через бумажные фильтры и хранят в холодильнике при температуре 10° С в течение 2-4 нед. Непосредственно перед постановкой теста смешивают равные количества растворов А и Б, смесь нагревают до 30-37° С. Кровь из пальца больного берут пипеткой, промытой гепарином. В центрифужной или пластиковой пробирке смешивают по 0,1 мл гепаринизированной крови и подогретой смеси. Инкубация 25 мин в термостате при 37° С, затем 10 мин при комнатной температуре. Из верхнего слоя клеточного осадка готовят мазки, высушивают их на воздухе 3-5 мин, фиксируют метиловым спиртом, затем окрашивают метиленовым зеленым в течение 10 мин. Препараты просматривают под микроскопом с иммерсией.