Основной проблемой при исследовании метаболизма является установление идентичности меченого продукта реакции искомому. Обычно для идентификации пользуются двумя методами: хроматографии и кристаллизации, имеющими свои ограничения.

Метод хроматографии не позволяет разделить полностью изомеры андростанадиола независимо от используемой методики: тонкослойной, газожпдкостпой или хроматографии на бумаге. Дополнительные сведения можно получить, проследив при хроматографии поведение разрушенных химически стероидов. Кетоновая группа может быть восстановлена до гидроксильной, но ацетплирование гидроксильных групп уменьшает полярность стероидов и соответственно зачастую снижает эффективность хроматографии.

Вторая методика зависит от кристаллизации радиоактивных метаболитов в присутствии предполагаемых стероидов, добавленных в качестве переносчиков. Полученные данные расцениваются как положительные, если после нескольких кристаллизации специфическая активность кристаллов остается постоянной (обычно плюс -минус 5%). При этом 20% и более радиоактивности сохраняется в исходном растворе. Если это не так, то следует думать о преципитации, а не о кристаллизации.

Другие методики, позволяющие определять идентичность меченых метаболитов, изложены в обзоре Brooks и соавт. Кроме технических издержек при экспериментах, проводимых in vitro, существуют очевидные отличия ситуации in vivo и in vitro, которые необходимо принимать во внимание. Так, отсутствие кровотока существенно изменяет состояние среды, в которой находится стероидный субстрат, а также скорость, с которой запирают субстрат для анализа, состояние самого субстрата и места действия ферментов.

Главными этапами в цепи метаболизма являются: исходное превращение холестерола в прегненолон и прогестерон; соответственно синтез из них дегидроэниандростерона (ДГА) или андростенедиона; ароматизация андростенедиона и тестостерона с образованием эстрона и эстрадиола соответственно. Все эти этапы включают отщепление карбонильных боковых цепей от основного стероидного ядра. Значение первого этапа заключается в том, что манный предшественник прогестерона не направляется только его синтез. Следующие два этапа приводят к образованию важных стероидов: андрогенов и эстрогенов.